耐药癌症患者免疫管理与存活率息息相关：试验研究结果与讨论

耐药癌症患者免疫管理与存活率息息相关：试验研究结果与讨论

 

 

Anca G. Gocan¹, Doris Bachg², A.E. Schindler ³和U.D. Rohr¹*

[1]奥地利维也纳减压诊所

²德国雷克林豪森市Bergh ä user路295号BIOFOCUS 2号（邮编：45659）

³德国埃森市Hufelandstrasse 55号医学研究和教育研究所（邮编：45122）

 

摘要

许多癌症患者并不是因器官功能受损而死亡，而是因一般身体状况（例如恶病质、肌肉减少症、抑郁症、感染或压力等）下降而死亡。一般健康状况下降可能是因肿瘤释放到身体内的免疫调节细胞因子而造成的。免疫力的提高不仅能通过抑制肿瘤释放到血液中的细胞因子来降低癌症副作用，而且根据新的假设，还能调节肿瘤中的癌症干细胞（CSC），而这些干细胞正是促进癌症生长和癌细胞转移的元凶。先前几次我们在癌症患者中间应用膳食发酵大豆配方（FSWW08）的调查报告显示：a）大大减轻了癌症症状；b）抗化疗；以及c）大大减轻了结合使用时化疗的毒副作用。通过对术后抗治疗的病患进行为期四年多的试验研究，本文报告了两项新发现。首先，既未发现抵抗治疗，也未发现副作用；其次，患者存活率超过预期。研究发现，患者健康和免疫状况都有所改善，且癌症干细胞的分化也有所增加，表明疾病侵略性降低，这通过基因表达（尤其是甾体激素、蛋白激酶、NF-κB以及肿瘤抑制因子p53——“干性”或“细胞分化”的典型标记）的增多也得以证实。尽管受到体积小、同质样本尺寸的限制，该项试验研究的结果还是说明了癌症干细胞分化和临床免疫症状之间的关系，这对生存结果造成了影响，且提高了测量卵巢癌、前列腺癌和乳腺癌中癌症干细胞的临床潜力。此外，在较大的队列研究中，也看到了存活率的提高，这些队列研究显示出了类似的基因表达谱，在本研究中，这是因在抗治疗的癌症患者中间应用FSWW08而引起的。

 

关键字：乳腺癌、细胞分化、循环肿瘤细胞、CTC、发酵大豆、FSWW08、卵巢癌、前列腺癌、肿瘤抑制因子p53、TP53。

 

介绍

经多次流行病学元分析证实，食用大豆食品可以预防各种癌症，尤其是乳腺癌[1, 2]。最近的流行病学研究发现，大豆的防癌效果与雌激素受体（ER）状况无关，且不管乳腺癌是否为ER-阳性（ER+）或ER-阴性（ER-）乳腺癌，或患者是否为东方[3-5]或白种女性[6]，或者是否为癌细胞显示非常低或无雌激素受体表达的ER-阴性乳腺癌患者，以及是否经历了存活率较低的更具侵略性的癌症，无法开展有效的化学预防或治疗。

抗化疗或放疗的癌症患者患有恶性癌细胞，它们具有非常低的激素受体表达，且与ER-阴性乳腺癌[7-9]中的癌细胞类似。由于大豆能预防ER-阴性乳腺癌，因此产生了大豆是否也能预防抗化疗癌症的问题，因为抗化疗癌症与ER-阴性癌细胞类似。为了调查大豆的抗癌效果能否扩展到抗治疗的癌症患者，我们通过一种特殊发酵的膳食营养大豆配方在癌症患者（FSWW08）[10-13]中间进行了多次研究。先前我们的报告显示，FSWW08减轻了相关免疫副作用，还降低了血液中循环癌细胞的侵略性，即使是在抗治疗的癌症中[10-14]。

本报告讨论了乳腺癌、卵巢癌和前列腺癌患者的长期试验研究结果：FSWW08在不造成任何阻力或其他不利副作用的情况下继续改善癌症患者的相关免疫副作用。令人惊讶的是大多数患者仍然活着，尽管几乎所有患者都被认为是抗化疗和放疗，这是加入本研究的一项要求。FSWW08可防

止向转移性肝肿瘤和骨肿瘤恶化，但对于患有肾上腺瘤的患者无效。

由于试验研究是更大的临床研究的基础，因此必须仔细检查数据。目前，还不能准确确定是哪些因素造成了存活率的上升。我们假设存活率的上升是以下协同组合的结果：a）营养状况的改善；b）免疫力的提高以及炎性细胞因子及其相关免疫癌症副作用的减轻；以及c）以前无效化疗的延长。然而，临床实验研究表明，FSWW08对体外和体内[10-14]中的癌细胞直接影响，尤其是在细胞分化增加的地方，根据增加的激素受体（尤其是“干性”标记肿瘤抑制因子p21和p53的增加）来判断。随着癌细胞分化的增加，病患的存活率也将有所提高，因此，通过本次试验研究，我们可以得出结论，FSWW08引起的细胞分化的增加可能有利于提高抗治疗癌症患者的存活率。FSWW08表现出较强的免疫提高能力（减轻花粉过敏和感染，尤其是病毒性感染）以及减轻与恶病质、压力、关节疼痛、口腔炎和抑郁症等（图1和图2）[10-12]直接与免疫相关的癌症症状的能力。有趣的是，新的一项有关如何抗癌的假设的重点在于提高免疫力[7, 8]。

自1942年美国政府邀请Goodman和Gilman确定了几个抗癌霉素以来，化疗已经拯救了许多生命[16]。然而，仍有许多病患未能受益，因为随着时间的推移他们对化疗产生了抵抗[17-19]。其次，许多癌症患者并不是因器官功能受损而死亡，而是因与免疫力相关的癌症副作用而死亡，例如恶病质、肌肉减少症、抑郁症、感染或压力（图1）[12, 18]。因此，癌症患者免疫力的提高将a）不仅通过抑制肿瘤释放到外周环流的细胞因子来减轻癌症副作用（图1）[20]，还将b）如Wicha等人所假设，减少抗治疗癌细胞，即肿瘤中所谓的癌症干细胞（CSC），而这些干细胞正是促进癌症生长和癌细胞转移的元凶（发酵大豆如图3所示）[7, 8, 15, 22]。在一个肿瘤的所有癌细胞中，99%以上的癌细胞都是分化细胞，具有较高的激素受体表达，        

 

 

图2 与服用含有奶酪素的安慰剂溶液的患者群相比，发酵大豆配方（FSWW08）日常使用对接受化疗的癌症患者食欲丧失（恶病质）的影响。这是一项双盲研究。从[12]转载。

 

对化疗起反应：癌症干细胞抗放疗和化疗[9]，根据Wicha及其同事的建议，化疗成功对分化的癌细胞和最初尺寸较小的肿瘤（图3所示白色癌细胞）有害，同时从死亡细胞释放IL-8等免疫活性细胞因子到肿瘤中，抑制干细胞的分化，以免它们继续处于未分化状态，我们现在将其确定为抗治疗癌症干细胞。由于尚未定义“干性”，癌症干细胞通常是指循环肿瘤细胞（CTC)。循环肿瘤细胞转化成进一步分化的癌细胞的过程可能会降低抗化疗和抗放疗性（图3）。因此，癌症患者免疫力的提高应抑制循环肿瘤细胞的增加并降低抗治疗性[20]，且同时减轻恶病质、抑郁症、压力和感染（图1）[23]。

 

 

图1 细胞因子引起的癌症的相关免疫副作用的概念模式，其支持肿瘤生长并导致心理行为症状（疲劳、抑郁症、以及认知障碍）、药物中毒、耐药性、厌食症和恶病质、疼痛、以及癌症复发和恶化。遗传背景、癌症治疗和心理困扰可以证实细胞因子的产生[15]。

 

 

图3 浸润性乳腺癌示意图。原发乳腺癌包括两种类型的癌细胞。癌症干细胞只有低雌激素受体表达，而原发癌则由68%的雌激素受体癌细胞表达组成。化疗或放疗不能减少癌症干细胞[8, 9, 21]。因此，很难预测癌症复发：通过化疗进行的癌症治疗原理开发。

 

 

免疫改性剂的共同管理增加了癌细胞中的细胞分化，并为白血病[24-30]和骨髓瘤（图4）[32-37]建立了化疗。地塞米松和放射治疗用于治疗单一和多发性骨髓瘤[32-37]。最近发现某些新研发的化学治疗剂拥有各自不同的干细胞分化性能，例如雷帕霉素引起成胶质细胞瘤的分化[38]。

自然生成的膳食化合物可以直接或间接影响癌症干细胞自我更新途径[39-41]。本文讨论了膳食化合物（其中包括姜黄素、萝卜硫素、表没食子儿茶素-3-没食子酸盐、白藜芦醇、番茄红素、胡椒碱和维他命D(3)）对其自我更新途径的直接或间接影响，且阐述了针对乳腺癌干细胞的能力。揭示大豆能预防ER-阴性肿瘤的流行病学研究支持大豆对乳腺癌干细胞具有直接影响的假设。本文讨论了FSWW08对血液中循环肿瘤细胞的细胞分化和存活率的影响。

 

 

图4 地塞米松、FSWW06（发酵大豆）、或体外染料木素在癌症组织、循环肿瘤细胞或树突细胞中分享改变基因表达级联。TP53表示肿瘤抑制因子p53基因表达，这是一个关键细胞分化标记且在96%的癌症患者中得以降低[31]；NF-κB表示核因子kB；MAP-激酶表示丝裂原活化蛋白激酶；c-june是一个关键免疫因子；而IL-6则表示白介素-6。

 

材料和方法

药物研究

在美国接受调查的发酵大豆产品（美国华盛顿州伍丁维尔海伦研究基金）FSWW08符合美国食品及药物管理局的罕见药分类，作为一种药膳或特殊医用食物。该身份同样在欧洲经EMAS认证。大豆中所含的植物化学物质通过一项专利发酵工艺[42]被分解成较小的分子单元。大豆发酵将蛋白质转化成更小的单元，以使其美味，并将蛋白过敏风险降到最低。尤其需要优化发酵工艺，以便蛋白质裂解成氨基酸，并保持伯克蛋白酶抑制因子的完整性：FSWW08包括900 c.i.伯克蛋白酶抑制因子[43]。

FSWW08含有其他成分中的生物活性异黄酮染料木素和大豆苷元[42]。被纳入FSWW08成分专利的活性剂MDT-13（13-甲基-十四酸）经证实将引起人类肿瘤细胞系中的细胞凋亡（即程序性细胞死亡）[44]。

 

基因表达分析

循环干细胞的提取和进一步加工如另行报告[14]。癌症定量信使核糖核酸（mRNA）表达通过使用5’-核酸酶（“水解探针”）化学过程（美国加利福尼亚州应用生物系统公司）实时RT-PCR方法来确定。每个水解探针的运行伴随着一个控制细胞系的一系列log稀释度，以便生产标准曲线。因此，表中的所有数值皆为根据标准曲线计算的细胞当量单位。为了让表达式数值具有可比性，这些数值都标准化至管GAPDH，这在各细胞系都得到了相等表示。所有基因表达测量值皆一式两份。

我们先前并未报告MAP-激酶级联或基质金属蛋白酶抑制剂和催化剂的基因表达。MAP-激酶级联和NF-kB与免疫力相关，这可能是用来解释癌症患者存活率的一个重要机制[45]。MCF7乳腺癌细胞发现在乳腺癌患者的血液中以及假设使用FSWW08的乳腺癌患者中。

 

前列腺癌、卵巢癌和乳腺癌患者临床试验

我们先前报告了耐药癌症患者[10]治疗方法开发的临床试点试验。关键参数（例如年龄、体重等）可参阅文献[10]。从2007年1月1日至2011年2月28日期间，住院接受可疑卵巢恶性肿瘤（初次诊断或复发）评估的患者。在获得书面知情同意后采集血样。研究包括在病理或细胞学上确诊为上皮卵巢癌或原发性腹膜癌的患者，以及在细胞学上确诊为乳腺癌、前列腺癌的患者。通过使用国际妇产科联合会（FIGO的分类系统来确定卵巢癌的疾病分期，使用TNM分期系统来确定乳腺癌的分期，并使用格里森氏分级来确定前列腺癌的分期。所有参与试点试验的患者将在接下来的四年内接受监控和临床评估。存活数据以及肿瘤抑制因子p53的基因表达如Kaplan-Meier曲线所示。

 

临床数据收集

在本回顾性队列研究中，所有临床数据皆取自文件冻结日期为2011年2月1日的患者病历。肿瘤等级和组织来自病理及细胞学报告。根据公认的标准进行分期：国际妇产科联合会（FIGO）卵巢癌标准，TNM乳腺癌分期标准，以及格里森氏前列腺癌分级。

计算从血样采集之日起到死亡日期（总存活数）或复发/恶化日期的存活时间，若病患仍然活着且没有疾病记录，则从血样采集之日起截至最近的记录联系来计算存活时间。患者被确诊为：SD-病情稳定；RE-病情缓解；PR-部分缓解，与住院时相比肿瘤缩小50%；CR-完全缓解。使用一份详细描述了癌症患者生活质量和治疗副作用的标准调查问卷来描述临床症状[10]。在对前列腺癌、乳腺癌和卵巢癌患者的小规模前瞻性研究显示，发酵大豆产品能减轻抑郁症、压力和恶病质等传统治疗不见起色的症状。它能减轻恶病质并显著增加体重。[10]

 

循环肿瘤细胞基因表达研究

我们先前报告了循环癌症干细胞在使用了FSWW08 [10-14]之后的基因表达研究的变化，并将调查时间延长至四年。从血液中提取癌症干细胞、肿瘤细胞浓缩和处理方法详见文献[46, 47]。测量癌症患者循环癌症干细胞的展望与限制（非癌症治疗标准方法，因此还没有确定接受范围）详见文献[46, 47]。

先前细胞培养实验[12]报告称FSWW08改变了体外和癌症干细胞中的NF-kB。前列腺癌和卵巢癌患者扩散的肿瘤细胞中的BAX/Bcl2-比率、细胞周期抑制剂p21和抗扩散因子雌激素受体β（ER-β）等细胞凋亡标记的基因表达增加。乳腺癌患者也显示增加了细胞周期抑制剂p21和p53，然而ER-β表达[12]并未增加。渗漏是肿瘤血管多发性异常的一种表现，对血管生成、肿瘤生长和转移都有所影响，同时对癌症中的药物输送和当前治疗干预新目标也有所影响[48-53]。

 

结果

 

循环癌症肿瘤细胞血液中的体内基因表达研究

据报道，通过静止免疫细胞的MAP-激酶/NF-kB级联（图4）[45, 54]，大豆异黄酮能减少炎性细胞因子，例如TNF-α和IL-6，这在血液循环肿瘤细胞中得以证实（图5-8，表1）。据报道，FSWW08改变了体外细胞培养物[14]的基因表达，尤其是增加了激素受体（图5和图6）、PPAR受体（图6）和肿瘤抑制因子p53（TP53）(图8)的基因表达，减少了NF-kB（表1）。此外，在长期应用于登记病人达四年后，循环肿瘤细胞中肿瘤抑制因子21 [10]和肿瘤抑制因子p53（TP53）的基因表达也所有增加，不管癌症类型如何（图8）。总体而言，在调查未经治疗时，共有50%的癌症患者无TP53基因表达迹象。因此，因大豆（图8）而增加的TP53以及NF-kB的改变有助于系统解释FSWW08预防乳腺癌复发的原理。最为重要的是，TP53是细胞分化的一个标记，可用来解释FSWW08降低抗化疗性的原理，甚至用来解释存活原理。

循环肿瘤细胞（图7）中的雌激素受体α和β都有有不同程度的增加。不管是哪种类型的癌症，雌激素受体α都未增加；而前列腺癌和卵巢癌中的雌激素受体β却有所增加。乳腺癌患者循环肿瘤细胞中未见雌激素受体β增加。

同样如图5所示，雄激素受体的基因表达有所增加，这在后续试验中得以证实，其中睾酮和“雄甾烯类”或“雄甾烷类”（例如雄甾烯二醇和雄甾烷二醇）有所增加，按照定义，它们都是具有雌激素和雄激素性能双性类固醇[12]。

值得一提的是，具有免疫调节性能的糖皮质激素受体也有所增加。

 

 

图5 通过FSWW08在血液循环肿瘤细胞（CTC）中发现的癌症患者血样的核受体基因表达与未经治疗的癌症患者血液循环肿瘤细胞之间的比较。以下颜色表示对数标度上基因表达的变化：无变化，

 

 

图6 FSWW08使用前后发酵大豆对乳腺癌血液循环肿瘤癌细胞所产生的基因表达变化。无变化，

 

 

图7 卵巢癌患者血液循环癌细胞与基线及与（A）前列腺癌患者、（B）乳腺癌患者、（C）卵巢癌患者1.5个月、3个月和4年后相比的相对基因表达变化。数值表示个别患者。

表8 使用FSWW08发酵大豆产品之后的试点试验期间雌激素受体α和β血液循环肿瘤细胞中的相对基因表达。X轴表示时间，分别为3个月内，1年后和四年后。前列腺癌循环肿瘤细胞至少通过五位患者测出，乳腺癌通过六位，而卵巢癌则通过四位，只靠一位患者，是无法完成测试的。

 

 

循环肿瘤细胞（即离开局部肿瘤腔进入骨髓或周边血液中的肿瘤细胞）对于在转移级联[55-57]期间建立远处转移最为重要。循环肿瘤细胞诊断对本地肿瘤腔癌细胞的诊断优势在于：第一，容易检测；第二，降低局部细胞因子及细胞通过针孔流出并流进外围的风险；第三，由转移形态的细胞形式组成。本方法的展望与限制详见文献[57]。但是在本次试验中发现循环肿瘤细胞有所减少，不管其高变异性，患者人数太少，以致于无法作出一般结论。

免疫和基因表达

患有花粉过敏或频繁流感病毒感染的患者据称在春季使用了FSWW08之后相关症状都得到了完全缓解（表2）。

据文献报道，哮喘或其他过敏性反应中具体细胞因子在细胞内的释放与局部免疫细胞[58, 59]中增加的c-Jun激酶、p38 MAP-激酶以及NF-kB相关。第一代抗组胺药物（例如苯海拉明和氯苯吡胺）通过增强细胞凋亡[60]保留了细胞因子提供的嗜酸性细胞存活。第一代抗组胺药物和大豆异黄酮对FSWW08有着相似的免疫调节反应。尤为重要的是，地塞米松拥有类似能力来改变p38 MAP-激酶的基因表达，尤其是骨髓瘤细胞中c-Jun和NF-kB基因表达，这可能有助于解释细胞分化的增加以及前列腺癌、乳腺癌和卵巢癌存活率的上升。如图7所示，当使用FSWW08时，MAP-激酶改变。

 

 

表1 BAX/Bcl是NF-kB的一个替代标记，决定了从癌症患者血液中提取的血液循环人类癌症细胞。比较基线水平与经过三个月FSWW08治疗后的水平。
癌症类型	乳腺癌（n=7）	卵巢癌	前列腺癌
患者人数 在体内，来自带有血液循环肿瘤细胞的人类癌症患者。经过三个月FSWW08治疗之后，在体外，来自带有血液循环肿瘤细胞的人类癌症患者。	7 -20% (±8%)	5 – 94% (±11% )	5 – 80% (±22% )

显然，用来减轻唇疱疹感染，减轻细菌感染，并消除酵母菌感染的抗病毒效果出乎意料。

 

增强身体健康状况和免疫力

据报道，FSWW08具有显著的临床效果，其中包括减轻压力、抑郁症[通过标准问卷调查EORTC QLQ-C30 (v1)来决定]，并通过改变循环细胞分子来提高免疫力，尤其是减少Th1并增加Th2细胞因子[10]。使用FSWW08（表2）还能直接增强身体健康状况，减轻花粉过敏和类似流感症状，减轻膀胱炎、口腔炎和风湿关节疼痛（表2），尤其是减少病毒性感染，从而提高免疫力。

 

提高存活率

除了一位患有恶性腺癌的女性之外，所有加入治疗的患者都还活着（图9-11）。在住院治疗时，并不清楚腺癌是否需要按照以前手术切除乳腺癌那样自主研发。该名女性死于癌症相关的并发症。癌症并没有在所有其他病患中增长（表2）。

在少数病患中，尤其是肝癌患者中，FSWW08减小了生命器官[10]中的肿瘤尺寸。举三个例子来说（两次为前列腺癌，一次为乳腺癌），一般健康状况将改善，以便外科医生尝试手术切除肝癌转移（表2）。直到今天，这些患者皆身体健康，且被诊断为无肿瘤（表2）。有趣的是，据外科医生报道，肿瘤已从组织上脱离。

 

使用FSWW08之后卵巢癌的存活率

卵巢癌是美国第二大常见妇科恶性肿瘤且是导致妇科恶性肿瘤死亡的首要原因[64]。卵巢癌之所以致命的一个重要原因就在于超过70%上的病例在确诊时已处于第三和第四阶段。晚期情况通常让存活率不甚乐观[65]。此外，尽管减少了大多最佳细胞色素氧化酶，晚期疾病患者仍在完成治疗之后实现了完整的临床反应，其中大多数患者最后都复发了[66]。执业医生所采取的任何用来帮助趁早诊断卵巢癌并检测转移的尝试都有可能改善存活率[67]。

通过目前的研究，我们已经发现，定期使用FSWW08与上述研究中免疫力的提高紧密相关。在患有癌症干细胞（图9）的患者中，发现无病存活率明显降低。据文献报道，CSC-阳性患者显示出15个月平均无病存活期，而CTC-阴性患者则显示为35个月无病存活期（图9）[67]。很难用非常少的患者人数来比较更大规模的试验，但是这可以说明使用FSWW08所带来的存活率远高于预期，且这可能受到增加的细胞分化和增加的肿瘤抑制因子p53（图9）的影响。

 

前列腺癌患者的存活率

据文献报道，格里森氏分级对前列腺癌患者的存活率有所影响[61]。抗治疗前列腺患者的格里森氏分级介于8和10之间，以使用FSWW08。如图10所示，所有患者目前都活着。尽管患者数量小，但是免疫力提高了，且通过FSWW08肿瘤抑制因子p53（图10）也增加了。前往肝脏的转移并没有增加。大多数患者都改善了身体健康状况和身体活动状况，消除了疲劳，且继续过着正常的生活。两名患有春季花粉过敏症的男性随着FSWW09的使用则完全缓解了症状。

乳腺癌患者的存活率

如图1所示，肿瘤抑制因子p53的表达对乳腺癌患者的存活率有着很大的影响。当肿瘤抑制因子p53的基因表达表示出来时（这里标记为“野生型”）乳腺癌患者的存活率将上升。FSWW08的使用在几乎所有癌症患者中（图11）的确增加了肿瘤抑制因子p53的基因表达。这一发现得到了强劲增长的免疫力的支持（表2）。

 

表2 个体癌症参数和伴随疾病和与治疗相关的调查结果

 

初次诊断时间	2007年1月1日住院时的情况	伴随疾病	使用FSWW08之前与免疫相关的疾病	使用FSWW08之后的临床观察	当前状况
乳腺癌 2003年4月 手术切除原发性乳腺癌 2005年7月 骨转移 手术切除乳腺癌   2003年12月 手术切除 2003年4月   2004年9月 2002年7月 手术切除原发性肿瘤   2004年1月 手术切除原发性肿瘤     前列腺癌 2001年9月 格里森氏分级：9 无淋巴结感染 骨转移 2004年11月 格里森氏分级：10 手术移除 2001年11月 格里森氏分级：9	两年直径为10毫米的肝转移观测   骨转移       腺癌关系到原发性肿瘤？ 骨转移   骨转移 肺转移     颈部皮肤转移 不能移除肿瘤       骨转移       肝转移     肺转移	睡眠失调、轻度抑郁症     抑郁症、压力、糖尿病 受糖尿病的影响，大腿自2004年3月开始溃疡   受损毛发生长 痔疮 压力、抑郁症、痔疮完全治愈   大腿及肺部水肿 压力和抑郁症     皮肤溃疡                 睡眠失调、压力、慢性疲劳、肺部水肿从而带来呼吸问题   睡眠失调、肺部水肿	经常感染流感、膀胱炎和口腔炎   -       花粉过敏、病毒性感染   花粉过敏、溃疡性结肠炎、病毒性感染 克虏伯综合症、压力、抑郁症 消除水肿               花粉过敏             溃疡性结肠炎、口腔炎、唇疱疹感染	建议患者再次接受化疗。 大力改善身体健康状况：减轻压力和抑郁症。 大力改善了身体健康状况，缓解了抑郁症和压力。 大腿糖尿病性溃疡伤口完全愈合。 花粉过敏完全缓解，然而患者死于癌症相关的副作用。 完全消除溃疡性结肠炎、压力、抑郁症和病毒性感染。 改善克虏伯综合症。 在使用了FSWW08之后大力改善了身体健康状况，患者不再接受化疗。 肿瘤尺寸较小且溃疡得以控制，这对患者来说轻松不少，因为它能减少感染。 患者不能接受手术治疗，只能接受病情稳定。 大力加强锻炼，患者每天下午骑自行车，这是以前没做过的。   手术切除三个肝转移；外科医生报告说转移已脱离组织且可轻易切除。 肺部水肿消除。 建议患者接受压力、抑郁症和病毒性感染完全缓解化疗。	在使用FSWW08八个月后手术切除肝转移后 CR SD           SD   SD SD     SD         SD       CR     SD

表2 续上页

 

初次诊断时间	2007年1月1日住院时的情况	伴随疾病	使用FSWW08之前与免疫相关的疾病	使用FSWW08之后的临床观察	当前状况
2000年2月 格里森氏分级：10 手术切除前列腺组织       2002年10月 格里森氏分级：9 卵巢癌 2006年10月 IIIA-微观腹膜转移       2006年9月 IIIA 2006年3月 IIIA-超出骨盆的微观腹膜转移       2006年2月 肿瘤局限于双侧卵巢   2006年6月 IV-远处转移至肝脏	肝转移           -     手术切除左侧 右侧复发       -   -         -	-           血栓症、压力、红斑性狼疮     骨转移、抑郁症、便秘、压力         肝转移、恶病质   -         恶病质     疲劳、恶病质、压力、抑郁症	-           口腔炎、病毒性感染、牙龈炎     花粉过敏、克罗恩病         类似流感症状   -         眼部感染     类似流感症状；唇疱疹；伤口愈合干扰	患者未报告改善身体健康状况或任何其他临床效果，主治医师建议继续治疗，因为循环肿瘤细胞的基因表达提高的，PSA也从235减少到14。 自2007年开始，未再患红斑性狼疮，且减轻了压力。   改善了身体健康状况，减轻了克罗恩病症，减轻了压力，患者没有接受化疗但是病情稳定。 患者恢复正常体重。 建议患者重新接受化疗。 尽管患者未报告改善任何身体健康状况或与免疫相关的病症，由于基因表达的改善，基因表达研究得以继续，化疗未带来任何如恶病质、压力这样的副作用。 化疗联合治疗减轻了肿瘤症状。 患者恢复体重。 建议患者重新接受化疗，恶病质和压力完全缓解。	SD           SD     SD         SD             PR   SD

 

CR：完全缓解；PR：部分缓解；SD：病情稳定

 

 

图9 文献（细线）中接受或未接受循环肿瘤细胞（CTC）检测的卵巢癌患者的总存活数：取自文献[61]。比较抗治疗卵巢癌患者在使用发酵大豆产品FSWW08前后在试点研究中的队列测试结果。

 

 

图10 根治性前列腺切除术之后生化复发所造成的前列腺癌死亡率风险详见[62]。粗线代表采用发酵大豆产品FSWW08治疗的患者存活率（n=6）；虚线表示使用FSWW08的时间。

 

一名屈服于病魔的患者。该名患者患上了肾上腺癌，不能确定这是否为来自手术切除的乳腺癌转移。但是需要注意的是，根据激素受体状况的增加来判断（图5和图8）以及TP53（图8），由于较高的细胞分化，使用FSWW08的乳腺癌患者的存活率与那些存活率较高的患者类似。

我们先前报告一名患者在三个月后停止使用FSWW08，因为这是正式试点研究的最后一步，且肝脏中的肿瘤得到了大幅萎缩[10]。在停止治疗之后，患者的肝脏肿瘤立即增大且伴随着急剧增加的抑郁症和压力。在再次使用FSWW08之后，肿瘤尺寸再度减小，抑郁症和压力也适当减轻[10]。六个月后，该患者在外科医生的帮助下通过外科手术切除了萎缩的肿瘤。自那以后，该患者已完全摆脱肿瘤困扰，被判定为病情完全缓解，但是循环肿瘤细胞仍然存在。

 

 

图11 乳腺癌患者无复发存活率Kaplan-Meier曲线。TP53在紫杉醇治疗下的突变状态存在差异（取自[63]）。粗线，患者接受FSWW08，一种发酵大豆饮料，如虚线所示（n=7）。所有参与治疗的患者在入院之初都具有耐药性。使用FSWW08增加了这些患者（粗黑线）的肿瘤抑制因子p53（TP53），详见发表的研究[63]。具有肿瘤抑制因子p53（一个细胞分化标记）表达的患者明显改善了存活率（蓝色线条）[63]。

 

讨论

本项长期试验研究的主要发现成果是，抗治疗性患者在使用发酵大豆饮料FSWW08（图9-11）时，存活率可能会有所提高，身体健康状况和免疫力也会显著增强。由于登记的患者数量太少，无法从该结果中推断出任何总结。然而研究人员可能会对该项研究产生特别的兴趣，将其作为后续研究的基础。体外和血液中循环肿瘤细胞的基因表达研究可以证实临床研究成果，它从癌症患者的血液中提取出肿瘤，检测到循环癌症细胞的细胞分化显著增加。据悉，循环肿瘤细胞细胞分化高的癌症患者，例如前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌患者，其存活率更高[61，62,63]。因此，FSWW08引起的细胞分化的增加可能有助于提高存活率。（图9-11）。

 

大部分癌症的标准治疗方法是积极进行手术，随后进行化疗[63]。例如卵巢癌是进行铂-紫杉烷化疗。治疗过后，约有25%的患者在六个月[31,63]内复发抗铂性癌症，能存活五年的可能性为31%[68]。卵巢癌死亡率如此高的原因是，超过75%的病例在确诊时已处于第三和第四阶段。与该项发现对应的是，五名先前抗化疗型卵巢癌患者样本在使用大豆发酵产品（FSWW08）（图9）后，打破了对铂的抵抗性。该产品用于乳腺癌和前列腺癌患者时，患者的存活率会得到提升。这些均证明了早期单一病例报告[11]。

缺乏成功治疗癌症的方法导致许多研究人员综合衡量临床解释为基因和表现基因异常病例，以确定影响病理生理学、影响结果、形成治疗目标的分子异常。第一次，我们在CTC中展现了基因研究，脱离早期肿瘤或变异，表明FSWW08共享骨髓瘤组织（图4）地塞米松治疗的基因变化，同时不会增加例如感染之类的副作用。

约有13%的卵巢癌由BRCA1/2[69, 70]基因突变导致，还有一小部分由其他基因突变导致。大部分卵巢癌可归因于躯体基因突变[71]的增加。直到最近才发现，肿瘤抑制因子p53基因（TP53）在卵巢癌患者316个组织样本的303个中发生突变。与之相比，分别有9%和8%出现突变的BRCA1和BRCA2病例中，有3%表现出躯体基因突变[63]。TP53突变可能对其他癌症也有巨大影响，这已经出现在临床试验中。在试验中，出现和未出现TP53变异的为癌症存活率较高的[62]带有TP53表达的女性患者。

我们在癌症患者循环肿瘤细胞中检测到显著的持续性变化，表现在与免疫相关的循环肿瘤细胞基因表达中，用体外细胞培养的大豆成分进行描述。大豆异黄酮显著降低各种NF-kB介导[54]基因表现，抑制p53依赖情况下[45]树突细胞的整体形成。这些影响可见于单核树突细胞和骨髓树突细胞[45]。有意思的是，TP53能降低（TNF-α导致的）NF-kB报告基因在体外的活跃度。体外研究作者已经发现，这一点通过TP53为饮食（使用大豆等植物化学物质）和疗法打开了新的视角，对移植，过敏、气喘等免疫干扰以及自动免疫进行干预，因为其能够抑制无用或过度的免疫反应[45]。这一推断在对患者的试验中得到了证实。       当前，TP53是否会成为大致判断癌症严重性和结果的因素还无从而知。但是，大量科学出版物表明，肿瘤抑制因素TP53能体现：a) 细胞分化；b) 细胞凋亡，判断乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌的严重程度；c) 在出现过敏、感染等免疫系统疾病的癌症患者中出现减少。

确定先天和后天免疫系统其他细胞是否对燃料木黄酮表现出相似的LPS刺激型NF-kB推动基因的P53依赖型抑制，十分值得研究。

除TP53-NF-kB结合体外研究外，TP53也表现出对体内NF-kB进行抑制。这是因为NF-kB依赖型细胞因子在巨噬细胞中出现升级，无TP53特征[72]和胸腺/脾脏组织[73]。此外还发现，TP53突变会引起严重的发炎，加剧慢性疾病[74]，导致乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、结肠癌、肾癌等许多肿瘤的恶化[75]。

在这项试验中，还发现了免疫系统出现持续优化，尤其是炎症、过敏、病毒感染（表2）的减少。这项发现十分重要，因为酵母菌、细菌、病毒感染在癌症患者中十分常见。此外，癌症患者4年内状况显著好转，减压方面尤为明显[10]。

显然，所检测到的基因表达效果与骨髓瘤地塞米松（图4）中的十分相似。但是地塞米松有两处显著差异。尽管FSWW08在基因层面上有许多相似处，例如NF-Kb、MAP激酶、c-June、细胞因子在4年中出现减少等，患者不会检测出任何长期使用可的松常见的副作用。

通过免疫改良剂进行细胞分化对人类癌症治疗进行的改善表现在骨髓癌治疗中。地塞米松具有防止发炎的特点，但不幸的是，它会造成免疫力下降，进而增加病毒感染。同时，它又会对氧化还原促存活核转录因子kB（NF-kB）和控制细胞放射灵敏度[34]的1号激活蛋白（AP-1）活动造成抑制。地塞米松已经表现出对IL-6细胞因子表现[35]的抑制。骨髓癌细胞中已经报告有NF-kB和IL-6 c-Jun介导表现，这与我们的研究一致[36]。经发现，地塞米松还会抑制6号白介素从确立的骨髓细胞增值因子——骨髓辐射干细胞（图4）中释放。地塞米松和骨骼放射疗法的结合使用能延长患者的存活时间，减少辐射诱导的骨髓抑制。

之前我们在第一份报告中表明，由于基因改造与鼻部及整体过敏治疗相似，FSWW08和地塞米松、抗组织胺药物一样，能够改善NF-kB和MAP-激酶。我们在早期出版物中假定FSWW08改造疗效无法用雌激素、睾丸素、黄体酮、糖皮质固醇受体描述。因此要回答这样一个问题，由于发酵大豆含有许多成分，FSWW08中的什么成分造成了这样的临床结果。另外还有为何FSWW08能够抑制炎症，提高抗病毒效能（表2）。

PUBMED文献中有10,000份报告显示，大豆成分在体外、细胞培养、动物研究中均有抗癌效果，在流行病学研究[1-6]中也表现出防癌功效。然而，仅有少量报告显示，大豆与改善癌症治疗有关。必须严肃说明，大部分体外和动物研究均使用了大量的大豆成分，其浓度之高能够起到药理性作用，在人体内无法实现。体内FSWW08抗癌机械性活性试验报告[14]显示，人体活跃状态下FSWW08的剂量要低许多。

通常，大豆发酵过程用以提高大豆中氨基酸的生物利用率，增加大豆蛋白质的吸收[43]。FSWW08尤其在生物技术上保护伯克蛋白酶抑制因子，该因素通常会在发酵过程[43]中受到破坏。大豆中的蛋白酶抑制剂为伯克蛋白酶抑制因子（BBI），通过几项不同目的的人类试验对其进行评估，并于1992年的FDA获得了新药发明奖（IND）[76]。该项研究包括六种不同来自FDA的IND，用于口腔黏膜白斑病、良性前列腺增生、前列腺癌、溃疡性结肠炎、牙龈炎、食道/肺癌。其他适应症为多发性硬化症和肌肉减少症[76]。据悉，BBIC在体内和体外均是一种强力癌症预防制剂[77, 78]。

FSWW08包括900个c.i.伯克蛋白酶抑制因子，比之前NIH[78]的临床人类癌症试验中检测的伯克蛋白酶抑制因子程度还要高。这也许可以解释胃肠道中抗炎症效果，例如口腔炎、溃疡性结肠炎的减少，以及临床试验中一些病人口部和牙龈炎的抗癌疗效。然而，由于只有少数大小合适的分子能够穿透胃肠道，进入血液，因此伯克蛋白酶抑制因子的口腔生物利用率较低，所以要注射胰岛素。部分伯克蛋白酶抑制因可以经口腔吸收，其对癌症治疗的功效需要进一步讨论和研究。

活性成分MDT-13（13甲基-14酸）为FSWW08成分，它能导致人体肿瘤细胞系[44]的死亡。

由于FSWW08在癌症患者身上表现出的减压功效和状况的改善，我们在患有战争带来的创伤性神经症（PTSD）[13]的抗治疗老兵身上进行了一系列后续试验。我们确实发现，尽管士兵们不愿意接受药物或心理治疗，他们的压力和压力症状还是有所消退。同时，在PTSD患者身上也出现病毒和细菌感染的大幅度减少，与FSWW08癌症试验患者类似。对PSTD患者甾体激素的分析显示，由于HPA-轴（下丘脑垂体肾上腺轴）FSWW08的作用，尤肾上腺素、雄甾烯二醇、雄甾烯三醇等DHEA代谢物都有显著增加。这项发现也许有助于解释癌症试验得出的的三种临床结果：肾上腺激素增加导致a) 减少压力和抑郁的HPA改善，b) 显著增强的免疫力——抗炎症、抗病毒、抗细菌，c) 最重要的是，肾上腺技术的增加使干细胞细胞分化增多，防止癌症的放射性伤害[36]和风湿性关节炎[79]。

正如Loria等人所所述，肾上腺激素和地塞米松一样提高免疫力，比糖皮质激素功效更大。这是因为肾上腺激素能够提高抗炎症、抗病毒、抗细菌感染[80]的作用。而地塞米松等葡萄糖-肾上腺皮质类脂醇不仅会造成发炎，还可能导致细菌和病毒感染。不幸的是，我们没有在癌症试验研究中判断出甾族激素，这种试验应该后续进行。尽管如此，还是有间接证据证明，肾上腺激素可能有助于加强免疫力，因为我们检测到Th2细胞因子[12]的增加和TNF-α等Th1细胞因子的减少，这与肾上腺激素[80]直接相关。

还可讨论的是，大豆异黄酮和DHEA及其代谢物雄甾烯二醇和进一步代谢物雄甾烯三醇[12]一样，都是雌激素受体测试的激动剂。Wicha等最近表明，大豆、姜黄素、维他命D等自然产品可能确实能够通过对癌症的主要动力CSC细胞进行分化，从而防止癌症[20，40]。我们在人类体内CSC激素受体基因表现变化试验中发现有肿瘤抑制因子p21（未表现在此，在[10，12]中有报告）和细胞分化的直接标志物TP53。最近还发现，肿瘤抑制因子TP53与干细胞表现有关[81-87]。然而，分子机制表现和“干性”控制依然难以理解。尽管如此，肿瘤抑制因子P53的缺失与miR-200c等级的下降、干性标志物的显现、大量乳腺肿瘤等级的发展有关[62, 84]。有推断显示，循环癌细胞TP53基因表现的增加会提高存活率。我们报告中的结果也支持了这一推断，p53的增加应看做是诊断结果的好转[81]。

经讨论，雄甾烯二醇能够增加前列腺癌细胞，因为它是一种“两性激素”，同时具有雄激素和雌激素激动剂受体亲和特征[88]。另外，雄甾烯二醇具有强大的癌症干细胞识别性能[89]，这也许可以解释（至少部分解释）阻力的降低和存活率的上升，因为癌症干细胞是癌症和转移的推动力。这一点应在体内和体外均进行更深入的研究。

尽管受到样本尺寸小、同质性的限制，本实验研究的结果仍能够说明侵入性循环肿瘤细胞和癌症等级的关系，同时提高衡量卵巢癌、前列腺癌、乳腺癌中循环肿瘤细胞的临床潜力。目前，就循环肿瘤细胞与癌症患者之间的临床关系还未达成共识[85，86]。例如，人们习惯相信，在卵巢癌病例中，上皮卵巢癌主要向腹腔直接扩散[87]。但研究表明，卵巢癌患者周边血液中也发现了类肿瘤上皮细胞[67]，因此这些研究没有明显的临床价值。循环肿瘤细胞测定的局限性和可存活与不可存活细胞的测定均包含在文献[90, 91]中。然而，研究趋势是在常规检测中测定循环肿瘤细胞。

必须开展大组群临床研究，其中包括癌症干细胞调查。我们的试验研究表明，加强癌症患者的免疫力可能不仅能大幅度提高存活率，也能改善癌症患者的病情和整体健康情况。值得一提的是，化疗这种新辅助疗法不会改变TP53有所隐藏的基因表达[21]，该研究可能针对另一种可能的疗法。

 

 

*通信作者：医学双博士U. D. Rohr

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接收日期：2011年7月26日

接受日期：2011年10月13日